常见的鱼病主要分为两种:传染性鱼病和侵袭性鱼病。传染性鱼病也就是细菌性、病毒性病种,大多数具有传染性;侵袭性鱼病一般指寄生虫性病种。

用显微镜或解剖镜检查鱼病,称为镜检。镜检是对目检时所确定的病变部位进行的更深化一步的工作。镜检的取材方法和步骤与目检差不多,即先外部后内部。

你知道吗?奠定了欧洲文明基础的古希腊居然是毁于一场闻所未闻的大瘟疫;罗马帝国的命运居然也是由大瘟疫而改变;令人难以置信的是,在战争之外居然还有另外一场恐怖的大战–
瘟疫。更令人难以置信的是,中国东汉末年三国鼎立局面的形成、基督教的兴衰、文艺复兴时期的到来、拿破仑命运的转折,居然也都掌握在一只看不见的黑手
–大瘟疫上。了解大瘟疫的发生历史,我们也许可以找到使人类远离瘟疫的方法。
那么对于水产养殖朋友们来说,了解弧菌的特点也许能让我们更好的防御病害的产生。今天让我们深入的了解这些横行于水产业的霸主究竟是何面目。
弧菌科介绍
外观:菌体短小、弯曲成弧形或直杆状、具有一端单一鞭毛、运动迅速;
革兰氏染色:革兰氏染色阴性;
呼吸:兼性厌氧,发酵葡萄糖,大多数菌株氧化酶阳性;
生长需求:许多菌株生长需要2%~3%氯化钠;
分布:弧菌科细菌广泛分布于自然界,以水中最为多见,其中有一些种对人类致病。
弧菌科家族成员 弧菌属 气单胞菌属 邻单胞菌属 发光杆菌属
发光杆菌属主要存在于海水中,对人类不致病 弧菌属
常见的弧菌属有36种,其中致病性弧菌就有12种,其中副溶血弧菌、溶藻弧菌、霍乱弧菌等最为常见。
菌落特征:
在TCBS平板上,呈黄色的菌落有可能是溶藻弧菌、麦氏弧菌或霍乱弧菌等,呈米黄色的有可能是河弧菌,绿色是副溶血弧菌。在科马嘉弧菌显色琼脂上,粉紫色菌落可能是副溶血弧菌,白色菌落可能是溶藻弧菌,蓝色或绿色菌落的可能是霍乱弧菌、创伤弧菌或其他弧菌等。
副溶血弧菌 具有嗜盐性 对酸敏感,在普通食醋中5分钟即可杀死;
对热的抵抗力也较弱; 对水产养殖动物的危害极大;
主要引起食物中毒和急性腹泻、还可引起伤口感染和菌血症。 培养特性
营养要求不高; 需氧或兼性厌氧;
在无盐培养基上不能生长,最适合生长的氯化钠浓度为3.5%,超过8%不能生长;
最适pH为7.7~8.0,但pH9.5时仍能生长,最适生长温度为30~37℃。 抵抗力
抵抗力弱; 不耐热,90℃ 1min即被杀死;
淡水中不超过2日,但海水中能存活47天以上;
耐碱怕酸,1%醋酸或50%食醋中1min死亡。 致病因子:TDH、TRH以及菌毛
最适宜的培养基:
温度为30℃—37℃,含盐2.5%—3%(若盐浓度低于0.5%则不生长),pH值为8.0—8.5。当pH6以下即不能生长,在固体培养基上菌落常隆起,圆形,表面光滑,湿润。在3%一3.5%含盐水中繁殖迅速,每8~9min为一周期。对高温抵抗力小,50℃
20 min;65℃ 5 min 或80℃ 1 min
即可被杀死。能够还原硝酸盐。本菌对常用消毒剂抵抗力很弱,可被低浓度的酚和煤酚皂溶液杀灭。分布极广,主要分布在海水和水产品中,我国华东地区沿岸的海水的副溶血性弧菌检出率为47.5%~66.5%,海产鱼虾的平均带菌率为45.6%~48.7%,夏季可高达90%以上。除了海产品以外,畜禽肉、咸菜、咸蛋、淡水鱼等都发现有副溶血性弧菌的存在。
创伤弧菌和灿烂弧菌
创伤弧菌(海洋弧菌)、灿烂弧菌,两种弧菌是海水养殖鱼类危害较大的弧菌。目前报道的主要是危害黄姑鱼、卵形、鲳鲹、大菱鲆、石鲽、鳗鲡和军曹鱼等

据报道,研究人员研究了22味中草药对创伤弧菌(Vibriovulnificus)和灿烂弧菌(V.splendidus)的体外抑菌作用。结果显示,22味中草药对其均有不同程度的抑制作用;其中,黄连和连翘对创伤弧菌的抑菌和杀菌效果最好,最小抑菌浓度分别为0.49mg/mL和1.95mg/mL,最小杀菌浓度与最小抑菌浓度相同;黄连、黄芩、连翘和黄柏对灿烂弧菌的抑菌和杀菌效果较好,最小抑菌浓度分别为0.98、1.95、1.95和3.90mg/mL,最小杀菌浓度分别为0.98、1.95、1.95和7.81mg/mL。
溶藻弧菌
1、是弧菌属细菌中耐盐性最强的致病菌,为嗜盐性弧菌之一,耐盐30-100g/L。
2、是一种常见的海洋伺机性病原体,是引起人类、水生动物细菌性疾病的重要病原之一。其数量居海水类弧菌之首。
3、因其生物学性状有许多与副溶血性弧菌相似,在《伯杰氏细菌鉴定手册》第8
版中将其列为副溶血性弧菌生物I 型菌。
4、它也是鱼、虾、贝等海水养殖动物的一种条件致病菌,当环境恶化时机体免疫机能下降,溶藻弧菌病容易爆发,特别当水温在25~32
℃下容易流行,因此养殖动物的溶藻弧菌病多发生在夏季,爆发时往往会造成水产养殖业巨大经济损失。
抗生素的耐药性
溶藻弧菌对青霉素类和糖肽类抗生素有很高的耐药性;对头孢4代、β-内酰胺/β-内酰胺酶抑制剂复合剂、喹诺酮类、大环内酯类抗生素及氯霉素均100.0%敏感;头孢1~4代的耐药率虽不是持续降低,但药物敏感性不断增高;对同类抗生素的耐药性也有很大不同,如氨基糖苷类的庆大霉素和丁胺卡那霉素,耐药率分别为15.2%和72.7%;某些抗生素虽然耐药率不高,但也不敏感,处于中介敏感范围,如头孢噻吩、头孢呋辛和复方新诺明。
如何鉴别溶藻弧菌
溶藻弧菌会分解TCBS平板中的蔗糖,使其菌落呈黄色,但培养时间超过24h后,部分菌落会变成绿色,这是由于培养基中的蔗糖被消耗完全所造成的,因此在使用TCBS培养基对溶藻弧菌进行分离时,应选择在37℃生长24h内的典型菌落。同样能够在TCBS平板上形成黄色菌落的弧菌还包括霍乱弧菌、鳗弧菌等,但通过CV培养基上的菌落形态、10%
嗜盐性试验和ONPG试验基本可以排除。因此,在对溶藻弧菌进行分离鉴定时,可先用TCBS和CV平板进行选择性分离,再用革兰氏染色、10%嗜盐性试验和ONPG试验这三种重要的生理生化指标进行初步筛选,最后采用分子生物学方法验证,可在保证分离的准确性的同时减少鉴定的工作量。
鳗弧菌
鳗弧菌为有鞭毛的革兰氏阴性细菌,无荚膜,不形成芽孢,能运动,氧化酶阳性,对O/129敏感。葡萄糖氧化反应呈阳性,具有典型的弧菌属细菌特征。当水产养殖动物在不良的环境条件下,遭遇不利刺激或是受伤时,会诱发疾病的产生。鳗弧菌引起的水产养殖动物疾病在世界范围内流行,可感染鲑鱼、虹鳟、鳗鲡、香鱼、鲈鱼、鳕鱼、大菱鲆、牙鲆、黄鱼等。鳗弧菌是条件致病菌,当水产养殖动物在不良的环境条件下,遭遇不利刺激或是受伤时,会诱发疾病的产生。
感染鳗弧菌后的鱼虾会表现出病情逐步加深的症状,有研究学者报道,部分感染鳗弧菌的鱼体表最初出现局部褪色,鳍条、鳍基部及鳃骨下部充血发红,肛门红肿,继而肌肉组织有弥撒性或点状出血,体表发黑,鳍部出现溃烂;解剖检验时有明显的黄色粘稠腹水,肠粘膜组织腐烂脱落,部分鱼肝脏坏死。
哈维氏弧菌 哈维氏弧菌( Vibrio harveyi )
是引起水产动物特别是海水鱼类流行性疾病的一种重要病原,曾经在世界范围内引起海水养殖虾类疾病
,也引起海水养殖鱼类的流行性疾病爆发。 拟态弧菌
拟态弧菌(V.mimicus)与不典型的霍乱弧菌关系密切,其形态学、DNA序列及性质与霍乱弧菌极相似,但生化反应不典型,
1981年从腹泻患者粪便中检出该菌,故由国外学者命名为”拟态弧菌”。
拟态弧菌系革兰阴性弧菌,具有单鞭毛,有动力,与副溶血弧菌、霍乱弧菌一样属正常海洋菌丛,广泛存在于自然界河水、海水和海产品中。菌株在不含钠或仅含1%氯化钠的营养肉汤中生长良好,可自水生动物中分离出来。
气单胞菌属和邻单胞菌属 氧化酶阳性,端鞭毛、革兰阴性杆菌、兼性厌氧。
根据表型特征,伯杰系统细菌学手册将其归为弧菌科。
水产养殖水体中弧菌的危害不言而喻,从根本上来说,是养殖环境生态系统的崩溃造成了弧菌的大爆发,并最终导致养殖动物发病死亡。

一、鱼病的病原来源

一、检查方法

病原来源,即传染源,对于传染性鱼病通常分为原发性来源和次发性来源,而对于侵袭性鱼病则称为直接来源和间接来源。

检查比较大的病原体,如蠕虫、软体动物幼虫、寄生甲壳动物等,宜用双目解剖镜。检查比较小的寄生虫,需用显微镜。一般采用下述两种方法检查:

(细菌)

1、玻片压缩法。

(1) 传染性鱼病的原发性来源和直接来源

玻片可用普通的透明玻璃为原料,将原料切割成12×6厘米大小的方块,边缘磨平即可。

这是鱼病的主要传染源,通常有四种形式:

检查时将要检查的器官或组织的一部分,或将体表刮下的粘液、肠道中取出的内含物等。

①患有传染性鱼病和侵袭性鱼病的病鱼及其尸体,这是最主要的病原来源。它们是鱼类病原体的“携带者”和“贮存者”。

放在玻片上,滴入适量的清水或生理盐水,再用另一玻片将其压成透明的薄层,然后放在显微镜或解剖镜下检查。

②患过传染性鱼病而已病愈的鱼,在相当一段时间内仍继续排放病原体,而成为“带菌者”。

检查时要把玻片从左至右或从右至左慢慢地移动,仔细观察,当发现有寄生虫或其胞囊,以及某些可疑的病象时,应停止移动,集中视力,将上面的玻片一点一点地平行移开(不要影响两玻片之间的检查物),用镊子、解剖针或微吸管等,将要取出的寄生虫或出现可疑病象的组织从薄层中取出,分别放入盛有清水或生理盐水的培养皿中,以待进一步处理(对鳃的检查不宜用此法)。

③天然水域存在的或中间寄主携带的致病微生物、寄生虫及其幼虫。

2、载玻片法。

④未经发酵的粪便。

适用于低倍或高倍显微镜检查。方法是用小剪刀或镊子取一小块组织或一小滴内含物放在一干净的载玻片上,滴入一小滴清水或生理盐水,盖上干净的盖玻片,轻轻地压平后先用低倍镜观察,若发现有寄生虫或可疑现象,再用高倍镜观察。

(碘泡虫)

二、检查步骤

(2) 侵袭性鱼病的次发性来源和间接来源

镜检是在目检的基础上进行的,在目检时要将检查的病鱼编号并记录时间、地点、鱼的种名、大小(重量)、年龄和依次目检时发现的病症与疑象,对需要镜检的组织器官或病象再依次镜检。

主要是被原发性来源和直接来源污染了的环境和物质,它通常包括两种形式:

1.粘液。

①被病鱼及其排泄物、尸体等污染的池水和底泥等。

粘液中往往有许多肉眼看不到的寄生虫,可用解剖刀刮取体表粘液,用显微镜或解剖镜检查。

②处理病鱼、或在病鱼池里使用过的、并已被污染的生产工具和饵料等。

2.鼻腔。

二、鱼病的传播方式

用吸管吸取少许清水注入鼻孔中,再将液体吸出,放入培养皿中(要多吸几次),用低倍显微镜或解剖镜观察。

各类不同的病原体大多有各自特殊的传播方式,常见的有以下两类:

3.鳃。

(1)直接传播

目检后用剪刀从左右鳃各剪取第一鳃两端和中间三个点的组织为代表,每点看2个视野。检查粘细菌可取鳃腐烂处旁边的组织,取下后放载玻片上,加清水静置10—15分钟后检查(因为粘细菌离开寄主后会聚集在一起),容易看到粘细菌。

通常是病鱼或带菌鱼与健康鱼群或其子代的直接接触,并将其所携带的病原体直接传给对方的方式,称直接传播,因方式的不同可分为两种方式:

4.口腔。

①水平传播

用镊子刮取上下颚的粘液在显微镜下检查。若是检查白头白嘴病,刮下吻部周围的粘液也要过10—15分钟后再观察。

因鱼类本身的活动,将病原体从一水域携带至另一水域,并直接传播给健康鱼群。

5.腹腔。

②垂直传播

剖开鱼体,取出所有内脏后用生理盐水自上而下冲洗腹腔,用平皿盛装冲洗液,稍加搅动,倒去上层清水,下沉水与沉淤物用吸管吸到载玻片上,逐次检查。

由亲代直接将病原体传播给子代。例如某些病毒可从亲代的卵巢、鱼卵传播给子鱼。

6.消化道。

(2)间接传播

目检后将肠道分为前、中、后三段,每段各取—点,用尖的剪在与肠平行的方向剪开一个小切口,用镊子从切口取一小滴内含物放载玻片上。滴上一小滴生理盐水,盖上盖玻片,在显微镜下每个部分同时检查两次。

病原体借各种媒介物而广泛传播的方式,称间接传播。

7.肝脏。

它可因媒介物的不同而分为四种方式:

目检后用镊子从肝上取少许组织放于载玻片上,盖上盖玻片轻轻压平,在低倍和高倍显微镜下观察。肝的每一叶要检查两片。

①水流传播

8.胆囊。

病鱼或尸体将大量病原体以不同方式散布在水中,借水的流动而传染另一水体,使病原体得以广泛传播。

取胆囊时要特别小心,切勿弄破,取出后放培养皿中,目检后取一部分胆囊壁放载玻片上,盖上盖玻片,压平,放显微镜下观察。检查胆汁时用吸管吸取胆汁,在镜下作载玻片法检查。

②粪便传播

9.肌肉。

未经发酵的粪便中常含有大量粘细菌,病鱼排泄物中常带有大量的病原体、它们均可污染水体。

剥去皮肤并目检后,先在前、中、后等部分取一小片肌肉放在载玻片上,盖上盖玻片,轻轻压平,在显微镜下观察,再用压缩法检查。

③动物传播

三、镜下观察病原体的计数方法

许多种水生昆虫、螺、蚌,以及蛙、蛇、龟和水鸟等常往来于不同水体,可将其携带的病原体传播到各处。

镜检时,除了解病原体的种类和对寄主的感染率(%)外,还要了解它们对寄主的感染强度,因而对每种病原体的数量要进行统计。

④人为传播

其方法与标准是:
细菌:肠炎、烂鳃、蛀鳍、赤皮病、疖疮等按表现的症状,用文字描述。真菌:水霉、鳃霉,按照对器官的比例大小,用文字和数字说明。原生动物:这类病原体用肉眼难于观察到,镜下观察一般也不可能逐个数清,因而采用估计法以“+”来表示,“+”表示有,“++”表示多,“+++”表示很多。

在病鱼池使用过的工具、受污染的池水、底泥的任意排放、腐败变质饵料的投喂、未经检疫的亲鱼和苗种的引进等,均可扩散和传播病原体。

其中:

(赤皮病)

鞭毛虫、变形虫和孢子虫的孢子,在高倍镜一个视野下有1—20个虫体记“+”号,20—5b个虫体记;“++”号,虫体51个以上记“+++”号,并注明是以孢子计算的。

三、传染性鱼病的来源和传播方式

纤毛虫、吸管虫庄低倍镜一个视野下有1—50个记“+”号,51—100个记“++”号,100个以上记“+++”号。

(1)传染病的来源:

小瓜虫可按孢子虫的标准统计。

1)原发性来源:患传染病的病鱼是传染性鱼病病原体的贮藏者。即使病鱼痊愈后,在很长一段时间内,
仍继续保持和排泄病原体,成为带菌者。

以上每—种统计数,都以任取放大同倍数的3个视野中观察到虫体的均值表示。

病鱼的尸体和未经发酵的粪便,也是传染病的原发性来源。

四、镜检须注意的事项

2)次发性来源:发病池塘的池水、底泥、饵料,对病鱼使用过的养鱼工具和网具等。

1.要用活的或刚死的鱼检查。

在发病鱼池中使用后,又去接触没有病的鱼池,使无病的鱼池遭受污染而导致鱼病,这些都是次发性来源。

由于鱼的死亡,寄生虫也会很快随着死去,且死后往往会改变形状或崩解腐烂,使原来所表现的症状无法文法辨别。

(2)传播方式:

2.检查的鱼要保持湿润。

1)病鱼或带菌鱼直接与健康鱼接触,或前者排出大量病原体到周围水体中,而感染健康鱼群。

若鱼体干燥,体表的寄生虫会很快死去,症状也变得不明显或无法辨认。解剖的鱼体和取出的器官也不能干燥,最好用湿布或湿而洁净的白纸盖在上面,保持一定的湿润状态。

2)带有大量病原体的病鱼尸体,可将大量病原菌、病毒散布于水体中而感染健康鱼群。

3.内脏检查解剖时要保持器官完整。

3)未经发醉的粪便及其他动物的粪便,将大量细菌带入鱼池,引起烂鳃病等细菌性病的发生。

要小心的将各器官逐一取出并分开放在解剖盘或其它干净的器皿中;对肠道、胆囊、膀胱等器官更要注意,不能有破损。

4)次发性来源的池水、饵料、养殖工具等,不经过消毒也可引起鱼病的传播。

4.用过的工具要洗净后再用。

5)许多水生动物和食鱼动物,如水生昆虫、两栖类、爬行类和鸟类等经常来往于病鱼池塘和健康鱼池塘之间,也能成为病原体的传播者。

每检查完—个器官时,要将使用过的剪刀、镊子和吸管等工具洗干净后,再用于另一器官的检查。

(体表寄生的孢子虫)

四、侵袭性鱼病的来源和传播方式

许多水生寄生性的原生动物、蠕虫、软体动物幼虫、甲壳动物以及水蛭等,都能侵袭鱼体体表和内部各器官,引起鱼病。

在原生动物引起的鱼病中,凡带有寄生虫的鱼和病鱼的尸体,是疾病的主要来源,称之为第一性来源。

鱼类多有集群的习性,活动时常常相互靠拢在一起,因此,鱼体皮肤上的口丝虫、斜管虫和车轮虫等,很容易从一条鱼传播到另一条鱼体上去。

而很多鞭毛虫、纤毛虫都有暂时离开寄主自由游动的能力,这样就更增加了传播的可能性。

(体表寄生的小瓜虫)

此外,小瓜虫等在寄主死亡后,具有离开寄主进行繁殖的习性,如不立即把尸体捞去,就会扩大传播的机会。

凡携带第一性来源的物体,如被沾染的食料、养鱼工具、
池水、池泥和水生动植物等,都是原生动物病的间接来源,也叫第二性来源。

如球虫和黏孢子虫成熟后,孢子不断地自鱼体进人水中,沉落于池底污泥里,污泥就变成侵袭性鱼病的第二性来源。

关于蠕虫病方面,
像指环虫和三代虫等,水体就是传播这些病原体的来源。它们的幼虫在水中,找到合适的鱼类寄主并进行侵袭。

又如草鱼吞食了水中寄生着原尾蚴的剑水蚤(中间寄主),就间接感染了九江头槽绦虫。

寄生桡足类只有雌性成虫寄生到鱼体上,所产出的卵在水中孵化、成长,所以水体就成为这一类病原体的来源。

(鱼鲺)

由鱼鲺寄生引起的鱼病则和寄生桡足类不同,鲺既能牢固地寄生在鱼体上,又能在鱼体上随时移动,并且还能脱离鱼体在水中自由游动。

鲺将卵产在水生植物或池中较硬的物体上,因此,水和带有鲺卵块的水生植物及其他物体,就成为鲺病病原体的来源。

如果养鱼池的水源来自养殖鱼类的湖泊,水库和河道等,水源本身就可能带有侵袭性的病原体,因此将此水源引入安全的鱼池中去,往往会引越流行病的爆发。

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