蛭弧菌是一种具有类似噬菌性质的细菌,但它不是噬菌体,更不是细菌。它对弧菌有较强的裂解作用,是水产养殖中主要病菌“弧菌”的天敌。

车轮虫可寄生在各种淡水鱼及海水鱼的体表、鳃等各处,有时在鼻孔、膀胱和输尿管中也有寄生。主要危害鱼苗和鱼种,严重感染时可引起病鱼的大批死亡。全国各个地区,一年四季均有发生,能够引起病鱼大批死亡主要是在4月~7月。车轮虫以直接接触鱼体而传播,离开鱼体的车轮虫能够在水中游泳,转移宿主,可以随水、水中生物及工具等而传播。池小、水浅、水质不良、食料不足、放养过密、连续阴雨天气等均容易引起车轮虫病的暴发。

一、病毒类肠道疾病肠炎病。

近两年,蛭弧菌产品的使用突然火了起来,市面上也出现了各式各样的蛭弧菌产品,有液体蛭弧菌,有粉剂蛭弧菌,还有蛭弧菌冻干粉,尤其是蛭弧菌冻干粉成了推广的新潮流,同样都是蛭弧菌冻干粉,有的产品用的很好,有的产品用了却见不到效果,很多养殖户甚至厂家都对蛭弧菌相关产品抱有疑问,本文通过对蛭弧菌知识的初步梳理,为养殖户、经销商、公司更好地理解、使用蛭弧菌产品提供一些思路。

危害:

危害对象:草鱼、青鱼。

蛭弧菌也叫噬菌蛭弧菌,属于细菌界变形细菌门蛭弧菌科蛭弧菌属,具有细菌的一切形态特征:

车轮虫少量寄生时没有明显症状,严重感染时,病鱼受虫体寄生的刺激,引起组织发炎,分泌大量黏液。鱼体消瘦、发黑、游动缓慢、呼吸困难而死。车轮虫在鱼的鳃及体表各处不断爬动,损伤上皮细胞,上皮细胞及黏液细胞增生、分泌亢进,鳃上的毛细血管充血、渗出,严重感染时一大片上皮细胞坏死。

症状:病鱼体色发黑,肛门红肿,严重时鳍调基部充血,腹部出现红斑,肠管发炎,呈红色或紫红色。

单细胞,弧形或逗点状,有时呈螺旋状。0.3-0.6×0.8-1.2微米,或仅为杆菌长度的1/3-1/4,端生鞭毛,比其他细菌的鞭毛粗3倍~4倍,与鞭毛相对的一端有钉状纤毛,被称为“感染锥子”,与菌体的识别和吸附宿主有关。其运动活跃,革兰氏染色阴性。

症状:

防治方法:

蛭弧菌比通常的细菌要小,能通过细菌滤器,所以普通的显微镜是看不到它的,至少要用到油镜,甚至需要染色才行。在相差显微镜下,可见蛭弧菌呈跳跃式的运动;电镜观察,蛭弧菌以弧、杆状为主。因为小,低于2万转的离心机对蛭弧菌的浓缩是没有意义的,而2万转的离心机一般是实验室才会配备。

寄生在体表和鳃上,鱼苗可出现“白头白嘴”或“跑马”症状。病鱼表现为鱼体发黑,离群独游。有的又成群围绕池边狂游,常引起鱼苗、鱼种的大批死亡。寄生于鱼体表的车轮虫在鱼体表来回滑动,剥取宿主的皮肤组织细胞和鳃组织作营养,破坏皮肤和鳃组织,影响鱼的呼吸和正常活动。

①鱼种放养前,用10ppm漂白粉浸浴。

蛭弧菌有寄生型,也有兼性寄生,极少数营腐生。非寄生型营腐生生活,可在蛋白胨和酵母提取物培养基上生长繁殖。从自然界分离得到的蛭弧菌都是依赖寄生型,迄今为止,还没有直接从自然界分离得到非寄生型。

防治措施:

②流行季节每隔半月用1ppm漂白粉全池泼洒一次,或投喂磺胺互药饵。

寄生型蛭弧菌生长,一般要求pH6.0-8.5;温度23℃~37℃,低于12℃,高于42℃时均不生长;能稳定分解蛋白质,一般不利用碳水化合物,而以肽、氨基酸作碳源和能源;能液化明胶;严格好氧。

一:硫酸铜和硫酸亚铁,一次量,每1立方米水体用硫酸铜0.5克-0.7克和硫酸亚铁0.2克,配制成合剂后全池泼洒一次。

③大蒜治疗。大蒜按每250千克鱼种投为250克的用量,拌入饵料,连为3天-6天。

温度不在适宜范围的时候,蛭弧菌是不生长的,所以使用时要充分考虑这一点。比如3月、4月份用它泡苗,效果肯定不好,如果改成拌料投喂,会对肠道控菌产生积极影响。

二:苦参碱溶液,一次量,每1方米水体0.4克,全池泼洒1次~2次。

二、寄生性肠道疾病

蛭弧菌的繁殖需要氧气,使用的时候也建议在早上8点~10点使用,这样可以获得较为充足的溶氧。另外,其耗氧不会达到非常剧烈的程度,因为其繁殖代时一般要4小时~6小时。

三:辛硫磷溶液,一次量,每亩地水位1米深,用量为40毫升,兑水50斤,全池泼洒1次2次。

1.球虫病。

蛭弧菌与宿主细胞之间,常表现出一定的特异性。不过,有的特异性较差,能侵入多种细菌。例如不同的蛭弧菌菌株,能侵入各类不同的植物病原菌。

四:市售杀虫药剂(敌百虫等)。

病原体:艾美虫。

从这一点上看,其比噬菌体、细菌素的广谱性要好。实际上蛭弧菌可感染许多不同科属的菌,但其总体上有一定偏向性,比如其可感染大多数革兰氏阴性细菌,但只对少数的革兰氏阳性细菌感兴趣,比如其不裂解枯草杆菌,同时也有报道指出其对某些真菌和肠道病毒也有一定的裂解活性。

危害对象:青鱼。

寄生的特异性也对实际使用方法有很大的影响,即蛭弧菌是不是不管好菌坏菌都会攻击?如果是这样的话,那么很难被我们所用了,实际上,其有一定倾向性,这就给实际的应用提供了更多的可能性。

症状:鳃部呈苍白色,肠管内壁形成许多灰白色“肿瘤”,病灶周围组织溃烂,产生白色脓汁。

华南理工大学郭衍彪郭衍彪的研究指出,蛭弧菌BDW03对试验组大菱鲆肠道没有控制作用的菌属为8个,这8个菌属中多为革兰氏阳性菌属。另外,其通过乳酸菌拌食饵料和泼洒BALOs喂食大菱鲆60小时后,乳酸菌和BALOs对大菱鲆肠道菌群中革兰氏阴性菌的控制作用优于对革兰氏阳性菌的控制作用。这也间接指出了蛭弧菌对细菌的裂解可能有一定的偏向性。

防治方法:

上海水产大学生命科学与技术学院徐琴等人的研究指出,加噬菌蛭弧菌和黏红酵母组的试验效果不理想,表明这两株菌体之间有一定的拮抗作用。而联合使用噬菌蛭弧菌和球形红假单胞菌组展示了净化水质,预防病害的优良前景,此组能有效地吸收氨氮、硫化物等有害物质。这也指出了蛭弧菌是直接可以和某些光合细菌直接混合使用的,这一点大大提高了使用的方便性。

①永生石灰彻底清塘。

再加上其他专家的一些总结,基本上蛭弧菌更偏向于革兰氏阴性杆菌,同时从即有的论文得知,其最好不要用酵母混用,但蛭弧菌可以和光合细菌混用,建议最好分开使用。同时还有一个关键点,即在一个20天的周期内,蛭弧菌对水体的调控作用能达到近2周时间。

②投喂碘液药饵。每250千克青鱼用4%的碘液30毫升,连用4天。

蛭弧菌要用双层平板而不用单层平板法检测,主要原因在于培养皿底部并不是十分平整,因此注入少量培养基铺平底部作为下层,会获得几近水平的底部,然后在上面将噬菌体和细菌混合物的培养基注入作为上层,这样使得观察物在同一平面,更利于噬菌斑的观察及分离纯化。

③投喂硫磺粉药饵。每250千克青鱼用药50克。

扬州大学王亚丽的研究指出,将蛭弧菌分离株BD5W以107pfu/mL浓度给小鼠灌胃,试验组和对照组均健康,证明噬菌蛭弧菌对小鼠没有毒性作用。

2.粘孢子虫病。

江苏省泰州市海陵区畜牧兽医站徐懿在噬菌蛭弧菌BD57的急性毒性试验研究指出,根据《兽药试验技术规范汇编》的要求选用小白鼠进行了急性毒性试验。分别采用灌胃和腹腔注射法进行了急性毒性试验,试验结果表明,噬菌蛭弧菌BD57对小鼠没有毒性作用。

病原体:粘孢子虫。

华南理工大学陈丽芸的研究也指出,至今没有发现蛭弧菌对真核细胞有毒的报道,对小白鼠、豚鼠、家兔等动物无毒性作用,对猴肾、Hela细胞组织培养也未引起细胞病变。迄今为止,相关报道表明蛭弧菌对人和某些动物无毒害作用。

危害对象:鲤鱼、鲫鱼。

蛭弧菌对于宿主菌的裂解过程一般分为五个步骤:识别、吸附与侵入、定位与合成、复制、裂解。

症状:在肠粘膜上形成白点状胞囊。Ⅱ龄以上的鲤鱼、鲫鱼,还可穿过肠壁,在肠外壁出现大量胞囊。

识别:在这个过程中,有趣的是蛭弧菌可以通过鞭毛实现跳跃式的运动,而向宿主菌快速移动,其是通过无鞭毛一端粘附于宿主菌表面的。鞭毛在这里起到了非常重要的作用,实际上,在一些发酵的试验研究过程中也发现,如果发酵罐内的浆叶转速过快,对鞭毛有损伤的话,蛭弧菌就无法再攻击宿主。

防治方法:

吸附与侵入:为了实现吸附与侵入这个目的,蛭弧菌菌体会以100转/秒以上的速度产生一种机械“钻孔”效应,加上蛭弧菌入侵时的收缩从而进入宿主菌的周质空间。

①将病鱼及时捞出,病鱼死后要深埋。

定位与合成:一是蛭弧菌会脱掉鞭毛,二是宿主菌会变成蛭质体。

②严格清塘,渔具、投饵用具要经常消毒。

复制:蛭弧菌在这个阶段实现了复制繁殖。裂解:在最后一个过程中,蛭弧菌会合成鞭毛,裂解宿主的细胞膜,释放出所有蛭弧菌。

③鱼种放养前,用500ppm高锰酸钾液或500ppm石灰氮浊液浸洗30分钟。

蛭弧菌有五种保存方法,其中以冷冻干燥法保藏效果最好,1个月的复活率为100%,其次为4℃营养肉汤液保藏法和-20℃甘油保藏法,17个月复活率均为67%。有一点要明确,其冷冻干燥完成之后,是在4℃环境中进行保存的。

3.侧殖吸虫病

蛭弧菌的使用方法,特别推荐在所有甲壳类养殖动物脱壳期之前使用,达到无刺激生物消毒这个效果。

病原体:日本侧殖吸虫。

脱壳期是这些养殖动物特别脆弱的时期,容易感染相关疾病,尤其是温度升高的时候更是如此;另外,在脱壳期,甲壳类动物特别敏感,很多消毒剂是不能使用的,而蛭弧菌则可以做到安全无刺激;使用上,建议提前2天左右使用,如果能先使用一些补钙产品之后再使用蛭弧菌那就更好了,因为一定量的钙离子可以促进蛭弧菌的繁殖。

危害对象:青鱼、鲤鱼、鲫鱼。

推广“配合化学消毒剂治疗疑难杂症”。到了养殖中后期,在温度高的时候,有些疾病非常难以治疗,主要的特点是止不住、易反复,这个原因主要在于化学消毒剂虽然具备了快速杀菌的效果,但其反弹也非常迅速,一般普通的化学消毒剂或者国标抗生素,使用后24小时~48小时,水体的总菌数甚至弧菌数可能比用前还要高,这可能是难以治疗的主要原因。

症状:病鱼身体发黑,游动迟缓,成群飘浮在下风水面。鱼苗或夏花鱼种在发病3天-5天后,可大批死亡。

为了让杀菌即迅速又持久,必需结合使用化学消毒剂和蛭弧菌。首先使用化学消毒剂对水底、水面进行综合消毒,同时内服国标抗生素进行体内消毒,在见到效果之后,再连续使用1次~2次蛭弧菌,就可以看到明显不同的治疗效果。因为化学消毒剂起到了快速压制的效果,而蛭弧菌则起到了长期压制有害菌的效果,强强联合,能有效抑制有害菌的繁殖。

防治方法:

在使用过硫酸氢钾底改片后,第二天可以大剂量使用有益菌,此时建议使用蛭弧菌和光合细菌一起混合使用,这一点已通过试验证明是可行的。也可以按20天一个周期,先行使用光合细菌,一周后再使用蛭弧菌原装冻干粉,也能达到比较好的使用效果。

①彻底清塘,杀灭螺虫师。

蛭弧菌主要针对大肠杆菌引起的相关肠炎疾病,因为在发酵蛭弧菌之前,必需先行生产大肠杆菌,再将蛭弧菌接种进去,大肠杆菌是蛭弧菌最为喜爱的细菌之一,因此其治疗此类肠炎效果会更好一些。另外,蛭弧菌本身就是一个宝库,其蛋白质含量丰富,可达细胞干重的60%~65%,DNA的含量为5%。

②育苗和夏花鱼种不要使用往年饲养成鱼的鱼吃。

(赵海永文/图)

4.头槽绦虫病

病原体:九江头槽绦虫。

危害对象:草鱼、青鱼、鲢鱼等当年鱼重。

症状:病鱼日渐消瘦,不摄食,口常张开,前肠后部转弯处,有许多细面条状的白色虫体,可造成鱼种大批死亡。

防治方法:

①用生石灰或漂白粉清塘。

②死鱼远离池塘掩埋。

③投喂敌百虫药饵。将90%的敌百虫晶体50克与面粉500克混合,连喂3天-6天。喂药前要先停食1天。

④投喂南瓜子药饵。用南瓜子250克研成粉末,然后与500克面粉、500克米糠拌匀,连续投为3天。

5.舌状绦虫病

病原体:舌状绦虫。

危害对象:鲤、鲫、鲢、鳙、草。

症状:病鱼腹大背瘦,用手轻压,有坚硬的感觉。

防治方法:

①春天晒干塘底,用生石灰清塘。

②驱杀欧鸟,切断发育环节。

6.毛细线虫病

病原体:毛细的线虫。

危害对象广泛。

症状:对夏花鱼种危害较大,可引起食欲不振、鱼体消瘦,逐渐死亡。

防治方法:

①用生石灰清塘。

②投喂晶体敌百虫药饵。把90%的晶体敌百虫,按250千克鱼种用药5克-7克,拌入饵中,连续投喂6天。